1、母種；母種可以通過分離和移接獲得，常用的培養(yǎng)基有以下幾種：
（1）、用0.3%的酵母或2%的麥芽汁提取液，加蔗糖和瓊脂各2%配制培養(yǎng)基，20℃的恒溫環(huán)境下，可有效地促使孢子萌發(fā)菌絲；
（2）、PDA綜合培養(yǎng)基、加磷酸鉀3g、硫酸鎂1g、維生素b1一片，采用這種培養(yǎng)基可以培養(yǎng)各種羊肚菌，分離要選用六至七成熟的子實體，挑取中空的內部組織一小塊或菌柄根據內部組織一小塊，接入斜面培養(yǎng)基上，置入20℃的恒溫環(huán)境中培養(yǎng)；
（3）、馬鈴薯250克（煮汁）、瓊脂和蔗糖各20g、蛋白胨牛肉膏各0.5g、水1L配制培養(yǎng)基，按常規(guī)制成斜面接種后，在20℃的恒溫環(huán)境下遮光培養(yǎng)，6至7天菌絲體既可長滿斜面既為母種；
2、原種、栽培種培養(yǎng)基配方：
（1）、棉籽殼38%、木屑36%、麩皮20%、羊肚菌基腳土和過磷酸鈣各2%、石膏蔗糖各1%，接種后置入20℃的恒溫環(huán)境中培養(yǎng)，27天左右菌絲體即可長滿瓶既為原種；
（2）、雜木屑75%、麩皮8%、黃豆粉和玉米粉各6%、腐殖土2%、石膏和白糖各1%，采用這種配方配制的培養(yǎng)基，菌絲體生長健壯，一般情況下22天左右菌絲體既可長滿瓶。
（3）、櫟木屑50%、棉籽殼30%、麩皮15%、羊肚菌基腳土2%、過磷酸鈣石膏，白糖各1%，嗯，常規(guī)方法、接種，置于20℃的環(huán)境中培養(yǎng)，25天左右菌絲既可長滿瓶。
二、菌核的形成；人工栽培羊肚菌，菌核是形成子實體的必然階段，如尖角羊肚菌粗柄羊肚菌，黑脈羊肚菌也能形成菌核，但是在不同的條件下形成能力有所不同，因此人工栽培羊肚菌時，采取促進菌核形成非常重要。
（1）、提供有利于菌核形成的營養(yǎng)物質；羊肚菌在培養(yǎng)基上，菌絲體生長緩慢，不利于菌核形成；葡萄糖，甘露醇、木薯粉、碳酸氫二胺、潘茄汁、麥芽提取物等對羊肚菌菌核形成有一定的促進作用。
（2）、提供有利于菌核形成的生態(tài)條件；溫度在15至20℃之間適宜羊肚菌產生菌核；培養(yǎng)基中使用堿性的碳源有利于菌核的形成，如果使用酸性的碳源則不利于菌核形成；菌核形成不需要光照，要在黑暗環(huán)境下培養(yǎng)。
